Posvátné síně Přírodovědného muzea jsou plné těch nejúžasnějších exponátů - divoce vypadajících prehistorických stvůr, nelítostných starověkých bojovníků, dávno vymizelých kmenů, afrických zvířat a legendárních historických hrdinů - ti všichni zde nehnutě stojí, navždy zmrazení v čase. Nebo ne? V akčně-dobrodružné komedii NOC V MUZEU nový noční hlídač zjistí, že opravdové dobrodružství začíná teprve ve chvíli, kdy zaklapnou dveře za posledním návštěvníkem a zdánlivě nehybné exponáty si začnou užívat divoké noční rejdy. Fantastické dobrodružství začíná v okamžiku, kdy si Larry Daley (BEN STILLER) - zkrachovalý snílek, který se svými vynalézavými nápady nikdy nenašel příliš velké uplatnění - pod tlakem nepříznivých okolností začne hledat obyčejné zaměstnání. Larry vždycky věřil, že byl předurčen k velkým činům. Nemá však sebemenší ponětí, k jak kolosálnímu a nebezpečnému úkolu se upsal v okamžiku, kdy s nechutí přijal práci nočního hlídače v muzeu. Před první směnou dostane do ruky velkou baterku, ohmataný manuál a je zanechán o samotě ve strašidelně opuštěném a obřím muzeu.

Ale počkat, co je to za šramot? Larry s němým úžasem sleduje, jak se prehistorická zvířata a slavné historické postavy jedna po druhé probouzejí k životu. Po mramorových chodbách se prohánějí Tyrannosaurus Rex a Attila Hun, mezi křehkými expozicemi korzují lvi s opicemi a Larry se marně snaží získat nad nastalým zmatkem kontrolu. Když se ocitne na samotném dně svých duševních sil, osloví Teddyho Roosevelta (ROBIN WILLIAMS), jednoho z nejslavnějších amerických prezidentů v historii, aby mu pomohl alespoň přežít noc. Vzrůstající obava, že přijde i o tuhle práci a znovu zklame svého syna Nicka, jej přiměje k neskutečné bitvě o záchranu muzea, v níž se konečně může stát tím smělým a neohroženým otcem, kterým chtěl vždycky být. Velký okamžik, na který čekal celou věčnost, právě nastal.